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大腸菌により発現させた蛋白精製の一般的手順

• 培養　１〜２リッターはいっぺんにやろう。
• 集菌　遠心して集めます。
• 菌破砕　フレンチプレスかソニケーションで破砕します。フレンチプレスとソニケーションでは菌の破砕のされ方が違うので、後の実験の結果が違ってきます。どちらでやるか必ず決めておきましょう。また、フレンチプレスは誤って使うと大変危険です。注意するように。使った後は、片づけをしっかりやろう。
• 遠心　核酸、Inclusion body、膜画分を除きます。
• Big column　400mlのDEAEカラムを使い、Stepwise法で溶出します。条件検討が適切に行われていれば、この段階でサンプルはかなりきれいになるはずです。最初にsmall scaleできちんと条件検討することが大切です。
• 更に精製　あと１〜２本もカラムを通せば、相当きれいになるはずです。少しは頭を使って実験すること。

　場合に応じて、硫安沈殿等をやってみよう（ちょっと面倒だけど）。リッター当たり10mg程度発現していれば、上の様に大きなカラムでstepwiseに溶出するのが最も手早くて便利だと思います。